RAW2647细胞是一种经典的小鼠巨噬细胞系，因其易于培养和操作而成为科研工作者的得力助手。然而，在培养过程中，RAW2647细胞易发生分化，导致细胞形态改变、功能下降，从而影响实验结果的可靠性。如何让RAW2647细胞保持原始的形态和功能呢？今天，我们将为您揭示RAW2647细胞培养的黄金法则，助您更好地掌握这一细胞系！

细胞信息

生长速率：倍增时间为11-30小时，生长快速，营养消耗亦快，因此在T25培养瓶中建议添加7ml完全培养基，并于次日观察生长速度。
传代比例：1:4-6
培养体系：采用DMEM高糖（品牌：中乔新舟货号：ZQ-100）+10%胎牛血清（中乔新舟货号：ZQ0500）+1%双抗（中乔新舟货号：CSP006）。
细胞形态：该株巨噬细胞呈松散贴壁的纺锤形、圆形或立方形。当细胞密度较高时，有些细胞可能轻微脱落变圆，或聚集在一起，部分细胞甚至漂浮，这些漂浮的细胞是活的。在传代时应收集这些细胞并进行离心，细胞沉淀可以继续培养。

换液频率

建议每周进行2~3次换液。

正确的传代方法

适当的传代操作是RAW2647细胞培养的关键，每一步都需细致谨慎，稍有不慎便可能导致细胞分化。RAW2647细胞不能用胰酶消化，使用胰酶反而更易引起分化。尊龙凯时人生就博在培养RAW2647细胞方面已有十余年的经验，摸索出一种刮刀传代的方法，该方法操作简单，有助于更好地控制细胞的分化过程。在此，我们为您提供视频教程以直观学习传代步骤。
当您没有准备刮刀时，建议按照以下操作步骤进行传代，以减少细胞的分化：
1. 细胞密度达到80%时，用手掌心轻拍瓶尾，观察细胞脱落情况。
2. 在拍打过程中，约50-80%的细胞会脱落，收集脱落的细胞。
3. 按照1:4-6的比例传代，并补充新鲜的完全培养基（T25瓶建议添加7ml）。
4. 切记不要使用枪头或巴氏吸管吹打，以免因个人用力差异造成细胞分化。

培养须知

在收到RAW2647细胞后，放入培养箱静置2-4小时观察细胞的贴壁情况并进行必要的记录。如果有少量漂浮细胞，需离心1200转5分钟以收集细胞。贴壁细胞请依据视频步骤进行传代处理，如无刮刀请参照上述“方法二”进行操作。如果您对传代密度及操作步骤仍有疑问，请立即联系尊龙凯时人生就博的销售人员或技术支持。
培养时的注意事项：该细胞传代时不需要用胰酶消化，而是应用无菌细胞刮板轻柔刮拭培养表面，将细胞收集并离心后重悬接种到新的培养瓶中。细胞形态呈松散贴壁的纺锤形、圆形或立方形。随着细胞密度的增加，巨噬细胞（圆细胞）的比例也会增多。细胞对血清质量非常敏感，使用高质量的胎牛血清能确保细胞的贴壁能力和正常功能。培养条件以及运输等外部因素可能会影响细胞状态，因此收到细胞后应给予适当调整和适应时间，请耐心呵护细胞的培养环境。强烈推荐使用尊龙凯时人生就博提供的培养基，以减少细胞培养过程中的变因。

RAW2647冻存管复苏步骤

1. 从液氮中取出冻存的RAW2647细胞，迅速放入37℃水浴中解冻。
2. 将细胞悬液转移至预温的培养基中，轻轻混匀（15ML离心管中加3ml）。
3. 以1000rpm离心5分钟，弃去上清，使用新鲜的培养基重悬细胞（T25添加7ml）。
4. 将重悬后的细胞接种于培养皿，放入37℃、5%CO₂的培养箱进行培养。
在复苏24小时后，您将可以继续进行传代处理。