本文介绍了哺乳动物蛋白提取的基本步骤及相关试剂盒的组成。根据尊龙凯时人生就博的推荐，使用该蛋白提取试剂盒可以简化实验流程并提高效率。

试剂盒组成

哺乳动物蛋白提取试剂盒包含以下成分：

• 5X Buffer: 10ml
• 5X NaCl: 10ml
• 5X SDS: 10ml
• 5X DOC: 10ml
• 5X NP-40: 10ml
• 20X PBS: 10ml
• Protease inhibitor cocktail: 0.5ml

蛋白提取步骤

步骤1: 准备细胞裂解缓冲液

根据5X Buffer，5X NaCl，5X SDS，5X DOC和5X NP-40按1:1:1:1:1的比例（v/v）调配细胞裂解缓冲液。每1ml细胞裂解缓冲液适用于提取106~107个细胞或5~20mg组织的蛋白质。使用前需加入10μl Protease inhibitor cocktail，以保护蛋白质的完整性。

步骤2: 洗涤和处理细胞或组织

对于贴壁细胞：去除细胞生长培养基，用PBS缓冲液冲洗细胞两次，然后加入细胞裂解缓冲液（106~107个cells/ml），将细胞放入冰袋中，于摇床上孵育30分钟，并间歇性重悬细胞，最后刮取并收集裂解液。

对于悬浮细胞：在700xg下离心5分钟后弃去上清液。再次用PBS洗涤细胞两次，在4°C下离心并去除上清。将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中（106~107个cells/ml），放置于冰袋中，于摇床上孵育30分钟。

对于组织：组织需切割成小块，并用PBS冲洗两次。添加细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），将样品转移至预冷微量匀浆器中，均匀化30~50次。均质过程的精确操作对于保护靶蛋白的功能至关重要。

步骤3: 离心和蛋白质溶液的制备

在4°C下，以12,000xg离心裂解的细胞10分钟，以沉淀细胞碎片。若需制备蛋白质溶液，可进行高速离心，使用100,000xg离心45分钟。

步骤4: 蛋白质上清液的收集

将含有蛋白质的上清液转移至冷冻管中，可在冰上保存以便立即使用，或将蛋白质溶液存储在-70°C条件下。这一流程结合了尊龙凯时人生就博的专业建议，确保蛋白质提取的高效与可靠。