在之前的分享中，我们已介绍了Western Blot实验中蛋白浓度的四种测定方法。本篇文章将专注于样本制备过程中常见的问题，并探讨相应的解决策略。

问题1：蛋白浓度低

可能原因包括：1. 细胞或组织量不足；2. 样本与裂解液比例不当；3. 样本未充分裂解；4. 使用的蛋白浓度测定方法不适合。

解决方案：1. 增加样本量；2. 根据样本量调整裂解液的用量，例如对100万细胞或20mg组织，添加100-200μL裂解液；3. 确保裂解时间充足，通常在低温下10-30分钟，组织样本需用物理方法破碎，细胞样本通过吹打或颠倒混合进行均匀；4. 选择与样本匹配的蛋白浓度测定方法。

问题2：出现透明胶状物质

此现象通常是基因组复合物的释放所致。

解决方案：1. 适当超声或使用1mL注射器反复抽吸，打断基因组DNA，从而消除粘稠感；2. 在加入Loading buffer并进行煮沸变性时，稍微延长煮沸时间。充分煮沸不仅可以释放与基因组DNA结合的蛋白，也有助于部分断裂基因组DNA，减轻粘稠感；3. 在裂解液中添加广谱核酸酶以帮助降解DNA。

问题3：上清层漂浮油脂

这通常是由于样本中脂肪含量较高导致的。

解决方案：1. 裂解后将样本低温静置，吸出漂浮的油脂；2. 若吸取后依然不理想，可以尝试使用二氧化硅进行吸附处理。

通过注意这些常见问题及其解决方案，您可以有效提升Western Blot实验的效率与准确性。借助尊龙凯时人生就博的专业支持，助您在生物医疗领域走得更远。